Pata H&E - H&E stain

Retina (o parte a ochiului ) colorată cu hematoxilină și eozină , nucleele celulare colorate în albastru-violet și material extracelular colorat în roz.

Pata de hematoxilină și eozină ( sau pata de hematoxilină și eozină sau pata de hematoxilină-eozină ; adesea prescurtată ca pata H&E sau pata HE ) este una dintre principalele pete tisulare utilizate în histologie . Este cea mai utilizată pată în diagnosticul medical și este adesea etalonul de aur . De exemplu, atunci când un patolog examinează o biopsie a unui cancer suspectat , secțiunea histologică este probabil să fie colorată cu H&E.

H&E este combinația a două pete histologice: hematoxilină și eozină . Hematoxilina colorează nucleele celulelor de un albastru purpuriu, iar eozina colorează matricea extracelulară și citoplasma roz, cu alte structuri luând diferite nuanțe, nuanțe și combinații ale acestor culori. Prin urmare, un patolog poate diferenția cu ușurință între părțile nucleare și citoplasmatice ale unei celule și, în plus, modelele generale de colorare din pata arată aspectul general și distribuția celulelor și oferă o imagine de ansamblu generală asupra structurii probei de țesut. Astfel, recunoașterea tiparelor, atât de oamenii înșiși experți , cât și de un software care ajută acești experți (în patologia digitală ), oferă informații histologice.

Această combinație de pete a fost introdusă pentru prima dată în 1876 de A. Wissowzky.

Utilizări

Procedeul de colorare H&E este principalul colorant în histologie, în parte, deoarece poate fi realizat rapid, nu este scump și colorează țesuturile în așa fel încât o cantitate considerabilă de anatomie microscopică este dezvăluită și poate fi utilizată pentru a diagnostica o gamă largă de afecțiuni histopatologice . Rezultatele colorării H&E nu depind în exces de substanța chimică utilizată pentru fixarea țesutului sau de ușoare incoerențe în protocolul de laborator, iar acești factori contribuie la utilizarea sa de rutină în histologie.

Colorarea H&E nu oferă întotdeauna suficient contrast pentru a diferenția toate țesuturile, structurile celulare sau distribuția substanțelor chimice și, în aceste cazuri, se folosesc coloranți și metode mai specifice.

Metoda de aplicare

Raftul de diapozitive a fost îndepărtat dintr-o baie de pată de hematoxilină.

Există multe modalități de preparare a soluțiilor de hematoxilină (formulare) utilizate în procedura H&E, în plus, există multe protocoale de laborator pentru producerea lamelor colorate cu H&E, dintre care unele pot fi specifice unui anumit laborator. Deși nu există o procedură standard, rezultatele prin convenție sunt în mod rezonabil consistente, deoarece nucleele celulare sunt colorate în albastru și citoplasma și matricea extracelulară sunt colorate în roz. Laboratoarele de histologie pot ajusta, de asemenea, cantitatea sau tipul de colorare pentru un anumit patolog.

După ce țesuturile au fost colectate (adesea sub formă de biopsii ) și fixate, acestea sunt de obicei deshidratate și încorporate în parafină topită , blocul rezultat este montat pe un microtom și tăiat în felii subțiri. Feliile sunt fixate pe lamele de microscop, moment în care ceara este îndepărtată cu un solvent și feliile de țesut atașate lamelor sunt rehidratate și sunt gata pentru colorare. Alternativ, pata H&E este cea mai utilizată pete în operația Mohs în care țesuturile sunt de obicei înghețate, tăiate pe un criostat (un microtom care taie țesutul înghețat), fixat în alcool și apoi colorat.

Metoda de colorare H&E implică aplicarea de hematoxilină amestecată cu o sare metalică sau mordantă , urmată adesea de o clătire într-o soluție acidă slabă pentru a elimina colorarea în exces ( diferențierea ), urmată de albire în apă ușor alcalină . După aplicarea hematoxilinei, țesutul este contracolorat cu eozină (cel mai frecvent eozină Y ).

Rezultate

Hematoxylin în principal culori a nucleelor de celule albastru sau violet închis, împreună cu alte câteva țesuturi, cum ar fi keratohyalin granule și calcificate materiale. Eozina colorează citoplasma și alte structuri, inclusiv matricea extracelulară, cum ar fi colagenul, în până la cinci nuanțe de roz. Structurile eozinofile (substanțele care sunt colorate de eozină) sunt în general compuse din proteine intracelulare sau extracelulare . De corpi Lewy și corpilor Mallory sunt exemple de structuri eozinofile. Cea mai mare parte a citoplasmei este eozinofilă și se face roz. Celulele roșii din sânge sunt colorate intens în roșu.

Mod de acțiune

Deși hemateina , o formă oxidată a hematoxilinei, este colorantul activ (atunci când este combinat cu un mordant), pata este denumită în continuare hematoxilină . Hematoxilina, atunci când este combinată cu un mordant (cel mai frecvent alum de aluminiu ) este adesea considerată „asemănătoare” unei pete de bază, încărcate pozitiv sau cationică . Eozina este o pată anionică (încărcată negativ) și acidă. Colorarea nucleelor ​​de hemalum (o combinație de ioni de aluminiu și hemateină) se datorează de obicei legării complexului colorant-metal de ADN, dar colorarea nucleară poate fi obținută după extragerea ADN-ului din secțiuni de țesut. Mecanismul este diferit de cel al colorării nucleare prin coloranți bazici (cationici), cum ar fi tionina sau albastru de toluidină . Colorarea prin coloranți bazici apare numai din soluții mai puțin acide decât hemalumul și este prevenită prin extracția chimică sau enzimatică prealabilă a acizilor nucleici. Există dovezi care indică faptul că legăturile coordonate, similare cu cele care țin aluminiu și hemateina împreună, leagă complexul de hemalum de ADN și de grupurile carboxi de proteine ​​din cromatina nucleară .

Structurile nu trebuie să fie acide sau bazice pentru a fi numite bazofile și eozinofile; terminologia se bazează pe afinitatea componentelor celulare pentru coloranți. Alte culori, de exemplu galben și maro, pot fi prezente în probă; sunt cauzate de pigmenți intrinseci precum melanina . Laminele bazale trebuie să fie pătate de pata PAS sau de unele pete de argint , dacă trebuie să fie bine vizibile. Fibrele reticulare necesită, de asemenea, o pată de argint. Structurile hidrofobe tind, de asemenea, să rămână clare; acestea sunt de obicei bogate în grăsimi, de exemplu adipocite , mielină în jurul axonilor neuronilor și membranele aparatului Golgi .

Exemple de țesuturi colorate cu H&E

Referințe

Lecturi suplimentare

  • Kiernan JA (2008) Metode histologice și histochimice: teorie și practică. A 4-a ed. Bloxham, Marea Britanie: Scion.
  • Lillie RD, Pizzolato P, Donaldson PT (1976) Petele nucleare cu coloranți solubili de lac mordanți în metacrom. Efectul reacțiilor chimice de blocare a grupului final și introducerea artificială a grupelor acide în țesuturi. Histochimie 49: 23-35.
  • Llewellyn BD (2009) Colorare nucleară cu alum-hematoxilină. Biotehnologie. Histochem. 84: 159–177.
  • Puchtler H, Meloan SN, Waldrop FS (1986) Aplicarea conceptelor chimice actuale la petele de metal-hematină și -brazileină. Histochimie 85: 353-364.

linkuri externe

Protocol