Reacție în lanț polimerază multiplexă - Multiplex polymerase chain reaction
Reacția în lanț polimerază multiplexă ( Multiplex PCR ) se referă la utilizarea reacției în lanț a polimerazei pentru a amplifica simultan mai multe secvențe de ADN diferite (ca și cum ar fi efectuat mai multe reacții PCR separate toate împreună într-o singură reacție). Acest proces amplifică ADN-ul în probe folosind mai mulți primeri și o ADN polimerază mediată de temperatură într-un ciclotermic . Proiectarea grundului pentru toate perechile de grunduri trebuie optimizată astfel încât toate perechile de grunduri să poată funcționa la aceeași temperatură de recoacere în timpul PCR.
Multiplex-PCR a fost descris pentru prima dată în 1988 ca o metodă de detectare a delețiilor din gena distrofinei . De asemenea, a fost utilizat cu gena sulfatazei steroizi . În 2008, multiplex-PCR a fost utilizat pentru analiza microsateliților și SNP-urilor . În 2020, au fost proiectate teste multiplex RT-PCR care au combinat mai multe ținte genetice de la Centrul pentru Boli și Control într-o singură reacție pentru a crește accesibilitatea la testarea moleculară și randamentul pentru diagnosticul SARS-CoV-2 .
Multiplex-PCR constă din mai multe seturi de grund într-un singur amestec de PCR pentru a produce ampliconi de dimensiuni diferite, care sunt specifice diferitelor secvențe de ADN. Prin vizarea mai multor secvențe simultan, se pot obține informații suplimentare dintr-o singură încercare care altfel ar necesita de mai multe ori reactivii și mai mult timp pentru a efectua. Temperaturile de recoacere pentru fiecare dintre seturile de grund trebuie optimizate pentru a funcționa corect într-o singură reacție, iar dimensiunile ampliconului, adică lungimea perechii de baze, ar trebui să fie suficient de diferite pentru a forma benzi distincte atunci când sunt vizualizate prin electroforeză pe gel . Alternativ, dacă dimensiunile ampliconului se suprapun, diferitele ampliconi pot fi diferențiate și vizualizate folosind grunduri care au fost vopsite cu coloranți fluorescenți de culoare diferită. Kituri de multiplexare comerciale pentru PCR sunt disponibile și utilizate de multe laboratoare criminalistice pentru a amplifica probele de ADN degradate.
Aplicații
Unele dintre aplicațiile PCR multiplex includ:
- Identificarea agentului patogen
- Genotipare SNP de mare viteză
- Analiza mutației
- Analiza ștergerii genelor
- Cuantificarea șablonului
- Analiza legăturii
- Detectarea ARN-ului
- Studii criminalistice
- Analiza dietei