Agregometrie cu electrozi multipli - Multiple electrode aggregometry
| Agregometrie cu electrozi multipli | |
|---|---|
 Multiplate Analyzer
| |
| Scop | Determinarea funcției trombocitelor |
| Test de | Tot sângele |
Agregometria cu electrozi multipli multipli (MEA) este un test al funcției trombocitelor în sângele integral . Testul poate fi utilizat pentru a diagnostica tulburările trombocitare, pentru a monitoriza terapia antiplachetară și este, de asemenea, investigat ca potențial predictor al necesităților de transfuzie și al riscului de sângerare în chirurgia cardiacă.
Instrument
Multiplate MEA Analyzer (Roche Diagnostics International Ltd) are 5 canale pentru măsurarea simultană a mai multor probe sau agoniști . Instrumentul detectează schimbarea impedanței electrice atunci când trombocitele se agregă pe electrozi metalici din cuva de testare . Fiecare cuvetă conține două perechi de electrozi senzori, fiecare măsurând schimbarea impedanței. Senzorii duplicat servesc drept control integrat al calității, iar analiza este acceptată dacă coeficientul de corelație al măsurătorilor este mai mare de 0,98. De asemenea, se calculează diferența fiecărei curbe față de curba medie și se acceptă o diferență mai mică de 20%. Cuve de testare conțin, de asemenea, o bară de agitare magnetică acoperită cu teflon . Creșterea impedanței pe măsură ce are loc agregarea este transformată în unități de agregare (AU) și reprezentată grafic în funcție de timp pe ecranul computerului.
Probă
Producătorul recomandă utilizarea hirudinei ca anticoagulant pentru probele care urmează să fie testate, dar studiile au arătat că heparina este o alternativă bună. 300 µL de sânge sunt necesare pentru fiecare analiză și se diluează cu aceeași cantitate de ser fiziologic . După pipetarea sângelui și a soluției saline în cuvă, testul este incubat timp de trei minute înainte de adăugarea agonistului ales. Testul este apoi început și agregarea plachetară este înregistrată la intervale de aproximativ 0,5 secunde timp de șase minute. Se calculează trei parametri: agregare , viteză și suprafață sub curbă (ASC). Agregarea (în UA) este înălțimea maximă a curbei de agregare , iar viteza (în UA / min) este panta maximă a curbei. AUC este cel mai important parametru . Este înregistrat în unități (U) și este afectat atât de înălțimea cât și de panta curbei de agregare și este cea mai bună măsură generală a activității trombocitelor.
Teste / reactivi multiplă
| ADP | Epinefrina | Colagen | Ristocetin | |
|---|---|---|---|---|
| Defect al receptorului P2Y | Scăzut | Normal | Normal | Normal |
| Defect al receptorului adrenergic | Normal | Scăzut | Normal | Normal |
| Defect al receptorului de colagen | Normal | Normal | Scăzut sau absent | Normal |
| Normal | Normal | Normal | Scăzut sau absent | |
| Scăzut | Scăzut | Scăzut | Normal sau scăzut |
ADPtest
Adenozin difosfatul (ADP) este un agonist al trombocitelor. Când este adăugat în sângele integral diluat cu ser fiziologic în cuva de testare, acesta stimulează receptorii ADP de pe trombocite, activând trombocitele. Activarea trombocitelor duce la schimbarea formei și degranulare, iar conținutul eliberat al granulelor activează în continuare trombocitele. Activarea induce o modificare conformațională în glicoproteina IIb / IIIa receptor (GPIIb / IIIa), conferindu - înaltă afinitate pentru fibrinogen . Legarea fibrinogenului de receptorii GPIIb / IIIa duce la punți de trombocite la trombocite și are ca rezultat agregarea trombocitelor. Medicamentele antiplachetare precum clopidogrelul și prasugrelul inhibă ireversibil receptorul ADP P2Y12 , ducând la o scădere a agregării plachetare induse de ADP. Medicamentele care inhibă receptorul GPIIb / IIIa, de exemplu eptifibatida , pot, de asemenea, reduce sau elimina răspunsul trombocitar indus de ADP.
ASPItest
În ASPItest se adaugă acid arahidonic la proba de sânge diluată cu soluție salină. Acidul arahidonic este transformat în prostaglandină H2 (PGH2) prin ciclooxigenază-1 (COX1), iar PGH2 este apoi transformat în tromboxan A2 (TXA2) prin tromboxan sintază . TXA2 crește agregarea trombocitelor, promovează degranularea și stimulează activarea trombocitelor. Inhibarea COX1, ca și în cazul acidului acetilsalicilic , și inhibarea sau absența receptorului GPIIb / IIIa, așa cum se observă în trombastenia Glanzmann , va reduce agregarea plachetară ca răspuns la acidul arahidonic.
COLtest
Colagenul este adăugat la amestecul de probă salină și se leagă de receptorii de colagen de pe trombocite. Acest lucru duce la o eliberare de acid arahidonic, care este convertit în puternicul activator de trombocite TXA2. COLtest este sensibil la inhibarea COX1 și GPIIb / IIIa și la trombastenia Glanzmann .
RISTOtest
Ristocetina formează complexe cu factor von Willebrand (vWF) care se leagă de receptorii glicoproteinei Ib (GP1b) de pe trombocite, provocând activarea și agregarea trombocitelor. Agregarea redusă sau absentă ca răspuns la ristocetină poate fi cauzată de lipsa sau reducerea vWF, așa cum se observă în boala von Willebrand (vWD), sau absența sau reducerea numărului de receptori GP1b, ca în sindromul Bernard – Soulier (BSS). RISTOtest poate fi efectuat în două concentrații; RISTOhigh și RISTOlow. În RISTOhigh, se aplică o concentrație de ristocetină de 0,77 mg / ml. Acest lucru induce în mod normal o agregare plachetară puternică, iar agregarea scăzută sau absentă poate fi cauzată de condițiile menționate anterior vWD și BSS. În RISTOlow, concentrația de ristocetină este de doar 0,2 mg / ml și la un nivel care nu induce în mod normal un răspuns de agregare puternic. Acest test poate detecta dacă vWF arată o tendință mai puternică decât normală de a agrega trombocite, care poate fi văzută într-un subtip de vWD numit vWDIIb.
TRAPtest
Peptida-6 care activează receptorul trombinei (TRAP-6) activează trombocitele prin receptorul 1 activat cu protează al receptorului trombinei (PAR-1). Legarea TRAP-6 la PAR-1 determină o schimbare conformațională a receptorilor GPIIb / IIIa de pe trombocite, oferindu-le o afinitate mare pentru fibrinogen. Fibrinogenul se leagă apoi de receptori, reticulând mai multe trombocite și provocând agregare. Agregarea în TRAPtest pot fi reduse sau absente în thrombasthenia Glanzmann , în cazul în care receptorii GPIIb / IIIa sunt puține sau absente, sau în cazul în care pacientul este de a lua o GPIIb / IIIa antagonist . Traptest are doar o sensibilitate minoră pentru inhibarea receptorilor COX1 și ADP.
Reactiv ASA
Adăugarea unui reactiv ASA ( acid acetilsalicilic ) la o probă de sânge reduce răspunsurile de agregare în ASPItest și COLtest. ASA inhibă ireversibil COX1 în trombocite, inhibând astfel producția de TXA2. Reactivul ASA este utilizat ca control al calității în testarea funcției trombocitelor cu Multiplate, permițând evaluarea răspunsurilor anormale ale trombocitelor în ASPItest și COLtest.
Reactiv antagonist GPIIb / IIIa
Acest reactiv este utilizat ca control al calității în testarea funcției trombocitelor multiplate. Antagonistul GPIIb / IIIa blochează legarea fibrinogenului la receptorii GPIIb / IIIa, prevenind formarea legăturilor trombocite-fibrinogen și rezultând o agregare plachetară redusă semnificativ ca răspuns la toți agoniștii. Reactivul antagonist este utilizat împreună cu testul TRAP și permite evaluarea unui control pozitiv.
Reactiv de prostaglandină E1
Prostaglandina E1 (PGE1) este un inhibitor de trombocite care determină o creștere a adenozin monofosfatului ciclic (AMPc) în trombocite prin stimularea activității adenilil ciclazei . AMPc este o moleculă de semnalizare intracelulară , iar creșterea AMPc inhibă mobilizarea calciului și agregarea plachetară indusă de activarea receptorului ADP P2Y1. Activarea receptorului P2Y1 inițiază agregarea plachetară ca răspuns la ADP. Receptorul P2Y1 este necesar pentru activarea trombocitelor induse de ADP, dar nu este suficient pentru o agregare completă a trombocitelor ca răspuns la ADP. AMPc inhibă agregarea plachetară, iar cantitățile scăzute de AMPc în trombocite duc la agregarea plachetelor. Reactivul PGE1 este utilizat împreună cu testul ADP în două scopuri: evaluarea sensibilității ridicate ADP (HS) și a controalelor pozitive ale testului ADP. Când la ADPtest se adaugă o cantitate mică de PGE1 (20 pl), aceasta induce o inhibare moderată a agregării în probe normale, dar crește foarte mult sensibilitatea trombocitelor la inhibarea de către clopidogrel. Acesta este motivul pentru care testul modificat se numește „Sensibilitate ridicată”. Adăugarea a 50 pl de PGE1 la ADPtest duce la o inhibare puternică a agregării induse de ADP și este utilizată pentru evaluarea controalelor pozitive ale ADPtest.